基因敲除
利用定製化的基因敲除小鼠模型，洞察關鍵遺傳機制，加速您的研究。
發現基因功能，探索細胞過程
深入了解疾病的發病機制與預防手段
簡化藥物發現中的藥效評估
基因敲除小鼠模型包括：
凯时K66生物擁有逾6000種基因修飾小鼠模型，也許您感興趣的基因就在其中，點擊查看成品小鼠模型資源庫列表。
您也可以聯繫我們的技術顧問，為您設計並定製您的基因敲除小鼠模型。
常規基因敲除
建立常規基因敲除（knockout，簡稱KO）小鼠模型，使您感興趣的靶基因功能在小鼠所有細胞以及整個生命過程中永久缺失。
通過CRISPR基因編輯技術，構建一個常規基因敲除小鼠模型一般需要4-6個月。
根據基因序列設計合成sgRNA與Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵，Cas9核酸酶、 sgRNA、基因組靶序列結合併切割雙鏈DNA ，通過非同源性末端接合(NHEJ)修復途徑造成靶基因的移碼突變或片段敲除，從而實現基因敲除。NHEJ修復是隨機的，可能在同一小鼠體內不同細胞造成的修復結果不同，F0小鼠需要繁殖一代，獲得穩定遺傳的敲除雜合子小鼠。
通過ES細胞打靶技術，構建一個常規基因敲除小鼠模型一般需要7-12個月。
構建以篩選基因新黴素（Neo）取代靶基因的一個或多個外顯子的重組載體，轉入ES細胞，獲得正確發生同源重組的ES克隆。ES細胞進行囊胚注射，獲得部分ES來源的嵌合鼠，嵌合鼠與野生型小鼠交配，最終獲得來源於重組ES細胞的雜合子小鼠。雜合子小鼠一條染色體上的靶基因指定外顯子被Neo基因所取代，雜合子交配獲得靶基因失活的純合子小鼠。
條件性基因敲除
利用條件性基因敲除（Conditional knockout，簡稱CKO），可以通過時間或組織特異性敲除您感興趣的靶基因，實現更精準的基因敲除，進行更有針對性的研究。
條件性基因敲除主要是通過染色體位點特異性重組酶系統Cre-LoxP、 FLP-Frt和Dre-Rox來實現的。其中最為常用的是Cre-LoxP系統，在待敲除的一段目的DNA序列的兩端各放置一個LoxP序列，得到Flox (Flanked by loxP) 小鼠。將Flox小鼠與特異性表達Cre的工具鼠交配，即可獲得具有組織或細胞特異性敲除目的基因的小鼠。
這樣的Flox小鼠避免了全身敲除小鼠可能出現的胚胎或新生致死，並且與不同的Cre工具鼠組合，可以使目的基因的表達或缺失發生在實驗動物發育的任一階段或組織器官。此外，若與控制Cre表達的其他誘導系統相結合，還可以對某一基因同時實現時空兩方面的調控，應用最為廣泛的是Cre/ERT系統。
通過CRISPR基因編輯技術，構建一個條件性基因敲除小鼠模型一般需要6-9個月。
通過ES細胞打靶技術，構建一個條件性基因敲除小鼠模型一般需要9-12個月。
KO first
KO first (Conditional Ready)是一種多用途的模型，與條件敲除策略類似，在目的片段的兩側分別放置方向相同的LoxP位點，同時還在靶片段5』端內含子中放置一個兩側帶有FRT位點的SA-IRES-reporter片段。這類小鼠模型主要有兩方面用途：
1） 與Cre工具鼠交配可去除Neo基因及Flox區域，成為報告基因（reporter）和基因剔除小鼠，用靶基因的啟動子表達reporter基因，通過檢測reporter基因的表達即可跟蹤靶基因的表達情況；
2） 與Flp工具鼠交配可去除SA-IRES-reporter片段，得到常規的Flox小鼠。而Flox小鼠與各種組織特異的Cre工具鼠交配即可得到各種條件型敲除模型。
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查看你一定聽說過Cre-lox重組系統，無論你是否直接進行過基因操作。由於Cre-lox系統具有操作簡單、重組率高的優點，如今已經成為體內外遺傳操作的強有力工具。利用Cre-lox系統，可以在特定細胞、組織或整個生物體，甚至在特定時間點敲除或表達某個基因，實現對特定基因的時空特異性操作，這對基因功能的研究和人類疾病動物模型的建立都具有深刻影響。
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